日韩欧美高清在线观看_超碰在线网站_国产欧美一区二区三区在线看蜜臀_黄色大片aa_国语对白刺激在线视频国产网红_国偷自产中文字幕亚洲手机在线_亚洲成av人在线视猫咪_日韩视频精品在线_国产精品黄页免费高清在线观看_免费aa在线观看_色六月婷婷亚洲婷婷六月_99久久免费看少妇高潮a片特黄_国产吃奶在线观看_日韩黄色片在线观看_日韩视频在线观看免费_91香蕉视频在线观看免费_一二区成人影院电影网_色综合一_黑人巨大精品oideo_精品综合久久久久久888

*培養(yǎng)基: 高糖DMEM (GIBCO 12430); 15%胎牛血清(BIOCHROM S0615); 0.1 mmol/L非必需氨基酸(GIBCO 11140-050); 2 mmol/L谷氨酰胺(GIBCO 25030); 0.1 mmol/L β-巰基乙醇(GIBCO 21985); 1 000 U/ml白血病抑制因子(CHEMICON ESG1107) 
凍存液: 90%胎牛血清或*培養(yǎng)液; 10%二甲基亞砜(DMSO, Sigma D2650) 

一 小鼠胚胎干細(xì)胞復(fù)蘇 
1. 操作前把培養(yǎng)液在37 ℃水浴中溫?zé)帷?nbsp;
2. 從液氮中取出一支凍存管的小鼠胚胎干細(xì)胞, 放入37 ℃水浴中晃動(dòng), 直到只剩下小冰晶。 
3. 吸取凍存管內(nèi)的細(xì)胞懸液加至有少量*培養(yǎng)液的15 ml 離心管中, 1 000 r/min 離心5 min。 
4. 吸棄上清液, 加4~6 ml 培養(yǎng)液, 吹打懸浮。 
5. 重復(fù)吹打, 制成單細(xì)胞懸液, 盡量避免氣泡。 
6. 轉(zhuǎn)移到1個(gè)已經(jīng)鋪好飼養(yǎng)層的25 cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。 
7. 每天換液。